細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

SK-MEL-28人皮膚黑色素瘤細(xì)胞

商品屬性

商品介紹

生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 多邊形

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）

生長(zhǎng)培養(yǎng)基:MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:8

推薦換液頻率 2-3天/次

參考資料(來源文獻(xiàn))

年齡（性別） 男性；51歲

組織來源 皮膚

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 皮膚黑色素瘤

生物安全等級(jí) BSL-1

倍增時(shí)間 27 hours (PubMed=77

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：

（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。

（3）加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，加入2倍量的中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。

（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。

（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。

（9）細(xì)胞凍存

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

公司正在出售的產(chǎn)品：

關(guān)聯(lián)血漿蛋白A(PAPPA)重組蛋白 Recombinant Pregnancy Associated Plasma Protein A (PAPPA)

ICAM3 Protein Human 重組人 CD50 / ICAM-3 蛋白

EFNA3重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CLEC7A重組人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

EFNA3重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 Protein

關(guān)聯(lián)血漿蛋白A(PAPPA)重組蛋白 Recombinant Pregnancy Associated Plasma Protein A (PAPPA)

CLEC7A重組人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

ICAM3 Protein Human 重組人 CD50 / ICAM-3 蛋白

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human gasic cancer marker CA199 人胃腸癌標(biāo)志物CA199

Humanglucocoicoidreceptor-β,GR-βELISAKit 人糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanComplemefragme5a,C5a檢測(cè)試劑盒人補(bǔ)體片斷5a(C5a)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織CDK2/CYCLINE激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

HumanProteinuria，UPELISAKit人尿蛋白(UP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

SK-MEL-28人皮膚黑色素瘤細(xì)胞兔白介素-6(rabbit IL-6)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔白介素-8(rabbit IL-8)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔白介素-10(rabbit IL-10)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔白介素-12(rabbit IL-12)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： 1,3-βD-Glu ELISA Kit

Mouse alkaline phosphatase (ALP) ELISA Kit 小鼠堿性0酸酶(ALP)檢測(cè)試劑盒

MouseDopamineD1receptor,D1RELISAKit 小鼠多巴胺D1受體(D1R)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanplasminogenactivatorinhibitor1,PAI-1ELISAKit人纖溶酶原激活物抑制因子1

通用型總巰基含量熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitIgG大鼠免疫球蛋白G