產(chǎn)品展示
操作步驟:
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒00 次費用切取含有目的DNA 片段的瓊脂糖凝膠條帶。
● 盡量切除不含有目的DNA 部分的凝膠,減少凝膠體積,提高DNA 回收率。
● 切膠時,請使用長波長UV (360 nm )光盒。且不要將DNA 長時間暴露在紫外燈下,以防DNA 損傷。
2 稱取凝膠的重量近似地確定其體積。
● 凝膠重量的稱量方法:取.5 ml 離心管電子天平稱初質(zhì)量,切膠裝在離心管后稱終質(zhì)量,兩者差即為膠的質(zhì)量。不同離心管的重量可能有差異,因此,每個離心管的重量需單獨稱量。
3 按照每00 mg 瓊脂糖凝膠對應(yīng)00 µl 溶液BD 的比例,向離心管中加入溶液BD。
4 50 ℃水浴7-0min,直至凝膠*溶化。期間需要振蕩混合3 次。
● 瓊脂糖必須*融化,以免堵塞柱子,嚴(yán)重影響DNA 段的回收效率。
● 如果總體積大于500 µl,可適當(dāng)增加溶膠時間。
● 若此時溶液變紅,可加0 µl 3M NaAC (pH 5.2)。
5 將步驟4 所獲溶液置于DNA 純化柱中,靜置2min 。
● 膠塊*溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱,因為純化柱在較高溫度時結(jié)合DNA 的能力較弱。
6 2,000 rpm 離心min。若溶液量大于DNA 純化柱的容積,可分兩次離心,棄濾液。
● 此時DNA 被吸附于DNA 純化柱中的硅膠膜上。
7 加入500 µl 溶液BD。2,000 rpm, 離心min,棄濾液
8 加入500 µl 溶液PE。2,000 rpm, 離心min,棄濾液。
● 溶液PE 初次使用前用無水乙醇按: 4 稀釋,即含80% 乙醇。
● 此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質(zhì)洗脫,以獲得高質(zhì)量DNA 段。
9 加入500 µl 溶液PE。2,000 rpm, 離心min,棄濾液。
0 2,000 rpm 離心 3min ,以*去除純化柱中的液體。
● 此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免殘留乙醇影響后續(xù)酶促反應(yīng)。同時也利于DNA 段的充分溶解。
將離心柱置于新的.5 ml 離心管中。向純化柱的處,懸空滴加30-00 µl 溶液Eluent (60℃預(yù)熱),靜置2min 。2,000 rpm 離心min,管底即為目的DNA 段。貯存于-20℃。
● 溶液Eluent 可用無菌雙蒸水代替,但其pH 需為8.0-8.5,加入體積視DNA 目的段的多少、用戶對目的濃度要求而定。
● 對溶液Eluent 60℃預(yù)熱,會提高提取DNA 目的段的產(chǎn)量。
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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格 |
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒00 次費用 | 00 次 | 來電可享受優(yōu)惠 |
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注意事項:
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒00 次費用● 溶液PE *次使用前請按瓶上標(biāo)簽加入4 倍體積的無水乙醇,即5 ml 溶液PE 中加入60 ml 無水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對電泳使用的Agarose 種類沒有嚴(yán)格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒有必要一定要使用低熔點的Agarose 等。
● 電泳時請使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請適當(dāng)延長電泳時間,在條帶分離清晰后進(jìn)行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強(qiáng)。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會偏低。
● 溶液Eluent(0 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA 片段可直接用于各種酶促反應(yīng)等,不會影響后續(xù)試驗。
● 為了保證回收效率,請不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的片段。
● 請嚴(yán)格按照操作步驟操作。
問:常用的DNA 濃度及純度檢測方法有哪些?
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒00 次費用答:回收得到的DNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過對比定量的Marker 來定量濃度;紫外分光檢測OD260/280 比值,OD260/280 比值在.7-.9 之間說明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會偏低,因為pH 值和離子存在會影響光吸收值,但不表示純度低。
問:長片段回收時應(yīng)注意哪些問題?
答:一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒00 次費用當(dāng)DNA 片段長度較長(5 kb 以上)時,回收效率會有所下降,這是DNA 切膠回收時的常見現(xiàn)象。此時建議按以下方法解決問題:
適當(dāng)增加待回收DNA 樣品的點樣量;
2 由于長片段DNA 不易從樹脂上洗脫下來,建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過程中對長片段DNA 的物理損傷,如混合振蕩操作不要過于劇烈,切膠時不要將DNA 長時間暴露在紫外等下。
根皮素 CAS 60-82-2 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
莫地平雜質(zhì)Ⅰ CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: 50mg
馬錢 CAS 3 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg
脫水內(nèi)酯 CAS 3448-28-3 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial
吳茱萸堿 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支
梓醇;Catalpol CAS 245-24-9 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg
白薇對照藥材 CAS 訂購|咨詢 規(guī)格: g
人參皂苷Rh3 : 05558-26-7 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
澤瀉醇F : 5552-45-2 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
7-beta-羥基 : 566-27-8 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
毛蕊異黃酮苷;Calycosin-7-O : 20633-67-4 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢
一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒00 次費用通用型煙草環(huán)斑病毒(Tobacco Ringspot Virus;TRSV)基因檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
原C(PGC)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PGC ELISA Kit, 英文縮寫:PGC,
血液半(cysteine)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
載脂蛋白B48(apo-B48)elisa檢測試劑盒 英文名稱:apo-B48 ELISA Kit, 英文縮寫:apo-B48,
大量真菌/酵母細(xì)胞基因組DNA純化試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:0次
蛋白磷酸酶受體B(PTPRB)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PTPRB ELISA Kit, 英文縮寫:PTPRB,
真菌/酵母菌ATP生物發(fā)光法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
激活素A(ACVA)elisa檢測試劑盒 英文名稱:ACVA ELISA Kit, 英文縮寫:ACVA,
體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶CYPA(EROD)活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
金屬硫蛋白2(MT-2)elisa檢測試劑盒 英文名稱:MT-2 ELISA Kit, 英文縮寫:MT-2,
體液脊髓過氧化酶(MPO)活性(DTNB)高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次